Ингибиторный эффект препарата на основе масляного экстракта водорослей на репродукцию вируса герпеса в культуре клеток in vitro

Импакт фактор - 0,750*

*Импакт фактор за 2017 г. по данным РИНЦ

Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Ключевые слова
Похожие статьи в журнале РМЖ

Читайте в новом номере

Регулярные выпуски «РМЖ» №1(II) от 30.04.2019 стр. 51-55
Рубрика: Инфекция
Цель исследования: изучить препарат на основе масляного экстракта морских водорослей (МЭВ) на репродукцию вируса простого герпеса 1, 2 (ВПГ-1, ВПГ-2) в эксперименте in vitro на чувствительной модели — клеточной культуре.
Материал и методы: исследование включало определение: цитотоксичности препарата на культуре клеток, противовирусного действия препарата непосредственно в клетках, ингибирования репродукции вируса после воздействия препарата и инфекционной активности ВПГ с помощью иммуноферментного анализа.
Результаты исследования: определены концентрации, при которых препарат не оказывает цитотоксического воздействия на культуру чувствительной клеточной линии, а именно — 50% тканевая доза — ТЦД50/мл составила 0,0055% раствора МЭВ. Концентрация препарата 0,001% — ТЦИД50 — доза, ингибирующая репродукцию вируса на 50%, дающая максимальное снижение на 2 lg ТЦИД50/мл для ВПГ-1 («L2») и на 1,75 lg ТЦИД50/мл для ВПГ-2 («ВН») инфекционной активности вируса при профилактической схеме внесения препарата (за час до воздействия вируса).
Заключение: установлено ингибиторное действие препарата МЭВ, имеющего химиотерапевтический индекс 5,5, что свидетельствует о противовирусной активности препарата. МЭВ является новым перспективным препаратом с механизмом действия, отличным от действия известных лекарств, таких как препараты ряда ациклогуанозина, и может применяться в лечение ВПГ-инфекции.

Ключевые слова: вирус простого герпеса, ВПГ, клеточная культура, масляный экстракт водорослей, противовирусное действие, in vitro.

Для цитирования: Н.Д. Львов, Мельниченко А.В., Л.М. Алимбарова, А.А. Никитина Ингибиторный эффект препарата на основе масляного экстракта водорослей на репродукцию вируса герпеса в культуре клеток in vitro // РМЖ. 2019. №1(II). С. 51-55
Drug inhibitory effect, based on algae oil extract, on the herpes virus reproduction in cell culture in vitro

N.D. Lvov, A.V. Melnichenko, L.M. Alimbarova, A.A. Nikitina

Gamalei National Research Center for Epidemiology and Microbiology, Moscow

Aim: to study the drug based on the algae oil extract (AOE) for the herpes simplex virus (HSV 1, 2) reproduction in an in vitro experiment on the sensitive model — the cell culture.
Patients and Methods: the study included the following actions: determination of the drug cytotoxicity on cell culture, determination of the drug antiviral action directly in the cells, determination of virus reproduction inhibition after drug exposure and the HSV infectious activity in enzyme immunoassay (ELISA).
Results: the concentrations, at which the drug does not have the cytotoxic effect on the sensitive cell line culture, were determined — 50% tissue cytopathic dose (TCD50/ml) was 0.0055% AOE solution. 0.001% drug concentration is TCID50/ml — the dose inhibiting the virus replication by 50%, giving a maximum decline by 2 lg TCID50/ml for HSV-1 («L2») and by 1.75 lg TCID50/ml for HSV-2 («VN») of virus infectious activity through the prophylactic regimen (1 hour before virus exposure).
Conclusion: the AOE drug inhibitory effect was established — chemotherapeutic index for AOE drug was 5.5, which indicates the drug antiviral activity. AOE is a new promising drug with another mechanism of action, different from the generally accepted drugs such as acycloguanosine drugs, for the HSV infection treatment.

Keywords: herpes simplex virus, HSV, cell culture, algae oil extract, antiviral effect, in vitro.
For citation: Lvov N.D., Melnichenko A.V., Alimbarova L.M., Nikitina A.A. Drug inhibitory effect, based on algae oil extract, on the herpes virus reproduction in cell culture in vitro. RMJ. 2019;1(II):51–55.

В статье представлены результаты оригинального исследования, посвященного изучению влияния препарата на основе масляного экстракта морских водорослей на репродукцию вируса простого герпеса 1, 2 в эксперименте in vitro на чувствительной модели — клеточной культуре.


   Введение

    В настоящее время человечество разработало основанное на двух основных принципах лечение вирусных инфекций: 1) противовирусную терапию и 2) вакцинотерапию. Это применимо и актуально в т. ч. для лечения герпетических инфекций (ГИ). Профилактика ГИ входит в схему лечения заболеваний, обусловленных герпес-вирусами.
    Основные группы препаратов, применяющиеся для лечения ГИ [1, 2]:
    аналоги аминоадамантана: тромантадина гидрохлорид;
    ациклогуанозины — ациклические аналоги нуклеозидов (ацикловир,    валацикловир, фамцикловир, ганцикловир, валганцикловир, соривудин, цидофовир1);
    аналоги пирофосфата — фосфономуравьиная (фоскарнет)1 и фосфоноуксусная кислоты1;
    интерфероны;
    иммунопротекторы;
    вакцины.
    В наших многолетних исследованиях [1, 3, 4] показано, в частности, что в связи с относительно невысокой биопроницаемостью через гематоэнцефалический барьер препаратов ряда ациклогуанозина, а также с учетом того, что герпес-вирусы — это прежде всего нейротропные патогены, применение этих препаратов не всегда оказывается высокоэффективным. Следует учитывать тот факт, что эти препараты давно используются в медицинской практике (с 1978 г.) и в связи с этим могут возникать резистентные формы мутантов. Резистентность практически в 95% случаев обусловлена мутациями в генах тимидинкиназы и ДНК-полимеразы, с которыми связан основной механизм действия этих препаратов [1, 2, 5].
    Все герпес-вирусы — лимфопролиферативные, нейропатогенные, системные иммунодепрессанты — пантропны. Как иммуносупрессанты, герпес-вирусы, в течение всей жизни человека оказывают постоянное, с годами все более усиливающееся «прессинговое» воздействие на иммунную систему макроорганизма: 3–5% генетического материала герпес-вирусов представлено опухолеродными генами (онкогенами), которые имеют возможность встраиваться в геном клетки хозяина. Герпес-вирусы способны встраиваться в геном клетки хозяина, а также способны к иммортализации лимфоцитов человека, вызывая бласттрансфоромацию, а многие представители семейства Herpesviridae: вирус Эпштейна — Барр, вирус герпеса человека 6 и 8 типа, вирус герпеса обезьян Саймири — прототипные модели для изучения вирусного канцерогенеза [2, 5].
    Вирусы герпеса активно влияют на жизненно важные функции организма, иммунобиологические системы его защиты (интерфероновый и цитокиновый статус, клеточные и гуморальные иммунные реакции), что приводит к изнашиванию компенсаторных механизмов организма с последующим развитием биологического угасания (старения) и модифицирует процесс апоптоза.
    В настоящее время одним из новых направлений научного поиска нашей лаборатории является изучение соединений — гомологов фукоиданов.
    Ученые всего мира много лет пытаются разработать способ управления процессом самоуничтожения измененных клеток. Первыми добились успехов японские ученые, когда они выделили из морской водоросли ламинарии особое вещество — фукоидан. Фукоидан связывается с рецептором — фактором некроза опухоли, который присутствует только на поверхности измененных клеток, и при этом запускается программа самоуничтожения — апоптоза. Многочисленные исследования, по данным современной литературы, подтверждают, что фукоидан является средством защиты не только от рака, но и от ревматизма, артритов, заболеваний сердца, желудочно-кишечных заболеваний, сахарного диабета и различного рода инфекций, повышают иммунитет. Так, в литературе имеются сообщения о противоопухолевых, иммуномодулирующих, антибактериальных, антивирусных, противовоспалительных и других свойствах фукоидана. По данным японских исследователей, фукоидан вызывает самоуничтожение больных клеток, пораженных раком, вирусом лейкемии [6, 7].
    Цель настоящего исследования — изучение нового препарата — масляного экстракта водорослей (МЭВ), состоящего из комплекса сине-зеленых и бурых морских водорослей и растительных компонентов, основными из которых являются ламинария сахаристая (Saccharina latissima), фукус пузырчатый (Fucus vesiculosus), ирландский мох (Chondrus crispus), и его действия в отношении вируса простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ-1 и ВПГ-2) в культуре клеток in vitro.

   Материал и методы

   
Исследование включало определение цитотоксичности препарата на культуре клеток, определение противовирусного действия препарата непосредственно в клетках, определение ингибирования репродукции вируса после воздействия препарата.
    В работе использовали монослойные перевиваемые клетки почек зеленой мартышки (Vero), полученные из лаборатории культур тканей ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Клетки культивировали на питательной среде ИГЛА-МЭМ (с 10% содержанием эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2 мМ L-глутамина, 100 мкг/мл гентамицина при t=37,5 °C, 5% СО2 и 98% влажности. Посевная доза составляла 2×105 клеток/мл. Клетки рассеивали в 96-, 48- и 24-луночные пластиковые планшеты до формирования полного монослоя.
    Готовили серийные разведения препарата МЭВ (от 101 до 105) используя смесь диметилсульфоксида (ДМСО) (в конечной концентрации 1,0–0,1%) и 0,05% этилового спирта на питательной среде ИГЛА-МЭМ, растворы стерилизовали путем фильтрации через мембранные фильтры с диаметром пор 0,22 мкм для дальнейшего использования.
    Для работы были взяты два вируса — ВПГ-1 штамм «L2» и ВПГ-2 штамм «ВН», полученные из Государственной коллекции вирусов ФГБУ НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Эксперименты проводили в 24-луночных культуральных планшетах, в тех объемах и условиях культивирования, что и при исследовании цитотоксичности. Множественность инфицирования составляла 0,1 ТЦИД50/клетка. После адсорбции вируса (в течение 1 ч) клетки отмывали и помещали в ростовую среду с содержанием 2% ЭТС.
    Инфекционный титр вируса определяли при титровании вируса в 24-луночных планшетах. Титрование вируса проводили по общепринятой методике, используя метод конечных разведений от 101 до 106. Для титрования готовили возрастающие десятикратные разведения вируса, которые вносили по 0,1 мл в лунку с клетками, используя по 4 лунки на каждое разведение вируса, планшеты инкубировали при 37 °C в течение 2–3 дней до образования цитопатического действия вируса. Титр вируса определяли по формуле в lgТЦИД50/мл по методу Рида и Менча.       Инфекционный титр вируса для опыта с препаратом составил для штамма «L2» -5,5 lgТЦИД50/мл и для штамма «ВН» -4,0 lgТЦИД50/мл соответственно.
    В системе доклинического исследования лекарственных препаратов первым этапом является оценка токсичности соединений для культуры клеток. Как правило, в процессе исследования цитотоксичности соединений изучают влияние различных концентраций препаратов на морфологию клеток, на которых проводят все дальнейшие исследования. В нашем исследовании также на клеточный монослой вносили различные концентрации препарата МЭВ, инкубировали в тех же условиях. Учет результатов проводили через 24, 48, 72, 96 ч культивирования клеток. Результаты опыта оценивали по снижению темпов роста культуры: 1) подсчитывали концентрацию клеток, применяя метод окрашивания клеток 0,4% раствором трипанового синего (живые клетки не окрашиваются, а мертвые окрашиваются в синий цвет); 2) изучали пролиферативную активность клеток при добавлении препарата путем определения индекса пролиферации (отношение числа выросших клеток к числу засеянных, окрашивание 0,1% раствора кристалл виолета); 3) определяли уменьшение процента жизнеспособных клеток (оценивали по количеству неокрашенных клеток в процентах от общего числа клеток). Количественно цитотоксичность выражали как ТЦД50 (тканевая цитотоксическая доза) — это концентрация препарата, которая вызывает 50% изменение морфологии клеток и нарушение поглощения клетками витального красителя по сравнению с контролем.
    Для более полной оценки токсичности препарата МЭВ провели дополнительный митохондриальный тест (МТТ). МТТ — колориметрический тест для оценки метаболической активности клеток. НАДФ-Н-зависимые клеточные оксидоредуктазные ферменты могут при определенных условиях отражать количество жизнеспособных клеток. МТТ широко используется как скрининговый метод измерения выживаемости клеток. В его основе лежит реакция восстановления желтой соли тетразолия (МТТ) митохондриальными дегидрогеназами живых клеток до пурпурных кристаллов формазана, которые нерастворимы в водной среде обитания клеток.
    Клетки Vero инкубировали в 96-луночных планшетах в присутствии различных концентраций препарата. После 24 ч культивирования клеток в каждую лунку добавляется по 20 мкл 3-(4,5-диметилтиазолил-2ел)-2,5-дифенилтетразолиум бромида. Через 2 ч экспозиции при температуре 37 °C живые клетки восстанавливают желтый до темно-фиолетовых гранул формазана. Затем из лунок удаляли среду и добавляли 100 мкл ДМСО для растворения образовавшихся кристаллов формазана, количество восстановленного продукта измеряется фотометрически с помощью планшетного анализатора при длине волны 530 нм за вычетом измеренного фонового поглощения при 620 нм. Выживаемость клеток в присутствии препарата рассчитывается по формуле:

    ОП опытных лунок = (ОП среды/ОП контр. лунок – ОП среды) ×100%,
    где ОП — оптическая плотность.

    Жизнеспособность клеток и количество оценивали по исключению трипанового синего. Концентрация препарата, которая вызывает 50% гибель клеток, рассчитывается по дозозависимой кривой.
    Для изучения влияния препарата МЭВ в различных концентрациях на ВПГ (штаммы «L2» и «ВН») в культуре клеток инфицировали клетки вируссодержащей суспензией. Эксперименты проводили в 24-луночных культуральных планшетах, в тех объемах и условиях культивирования, что и при исследовании цитотоксичности. Множественность инфицирования составляла 0,1 ТЦИД50/клетка. После адсорбции вируса (через 1 ч) клетки отмывали и помещали в ростовую среду с содержанием 2% ЭТС.
    Для определения противовирусного действия препарата МЭВ на накопление ВПГ в    культуре клеток были исследованы образцы вируссодержащей жидкости (ВСЖ) из 96-луночных планшетов из предыдущих опытов (в эксперимент были взяты концентрации препарата 0,01% и 0,001% как наиболее перспективные). Для этого планшеты с инфицированными клетками и препаратом после проведения эксперимента (т. е. на 2–3-е сут) однократно замораживали и оттаивали и в дальнейшем отбирали из планшетов ВСЖ для исследования методом иммуноферментного анализа (ИФА).
    Твердофазный ИФА проводили по стандартной методике. На 96-луночные планшеты сорбировали моноклональные антитела к ВПГ на 24 ч, затем вносили образцы ВСЖ в серийных разведениях 1:100, 1:300, 1:900, 1:2700, 1:8100, 1:24300 и далее в раститровке с шагом 3, контроли — контроль клеток, контроль вируса, ДМСО, культуральная питательная среда, препарат МЭВ в разведениях. Результаты оценивали по ОП на планшетном фотометре при длине волны 492 нм.
    Статистический анализ выполнен с использованием пакета программного обеспечения Statistica StatSoft 10.0. Определялся ряд данных в процентном выражении, среднее арифметическое (М), стандартная ошибка среднего арифметического (m). Достоверность различий между показателями определялась с использованием критерия Стьюдента, различия считали достоверными при р<0,05, высокодостоверными при р<0,001, недостоверными при р>0,05.

   Результаты и обсуждение

   Определение цитотоксичности МЭВ

    На первом этапе исследования необходимо было определить цитотоксичность препарата, т. е. возможность использования препарата без повреждающего действия на клетки и максимально переносимую концентрацию.
    Данные представлены в таблице 1. Для адекватной статистической обработки материала на каждую концентрацию препарата отводилось 3–4 лунки, опыты воспроизводились в 3 повторах.
Таблица 1. Исследование цитотоксичности препарата МЭВ на культуре клеток Vero
    В результате проведенных исследований обнаружено, что препарат МЭВ в концентрации 0,1% оказывает выраженное цитопатическое действие на клетки в первые сутки (нарушение морфологии клетки, снижение жизнеспособности более чем на 90%), а в концентрации 0,001% не оказывает токсического влияния на физиологическое состояние клеток, показатели равнялись контрольным. МЭВ в концентрации 0,01% слаботоксичен, при этом отмечается снижение темпов роста культуры и процента жизнеспособных клеток на 54%. В случае воздействия 1,0 и 0,1% раствором препарата наблюдался выраженный цитотоксический эффект, что отражалось на первые сутки наблюдения статически достоверным снижением как плотности клеточной суспензии, так и жизнеспособности клеток (р<0,0017).
    Установлено, что 50% тканевая цитотоксическая доза 
ТЦД50/мл составила 0,0055% раствора препарата МЭВ.
    В митохондриальном тесте были определены эффективные концентрации препарата, вызывающие 50% ингибирование выживаемости клеток (IC 50). Значения абсорбции представлены в относительных единицах. Для контроля (без препарата, 1% ДМСО) значения линий составляют 0,904±0,05 и 1,03±0,08 (рис. 1).
Рис. 1. График дозозависимой кривой препарата МЭВ в отношении клеток Vero
    В дальнейших исследованиях использованы только концентрации препарата МЭВ 0,01–0,00001%, т. к. более высокие концентрации (1,0–0,1%) использовать нецелесообразно, поскольку они оказывалют выраженный цитотоксический эффект на клетки.

   Исследование противовирусного действия препарата МЭВ на репродукцию вируса простого герпеса in vitro в культуре клеток

    В опыт были взяты только концентрации препарата МЭВ 0,01–0,00001%. Разведения препарата вносили в культуру клеток по трем различным схемам: 1) за 1 ч до инфицирования вирусом (профилактическая схема); 2) одномоментно с вирусом; 3) после инфицирования вирусом в течение 1 ч (лечебная схема). После проведения эксперимента (до полного проявления цитопатического действия (ЦПД) вируса на клеточном монослое, которое оценивали под микроскопом по появлению характерного ЦПД каждого штамма вируса) планшеты однократно замораживали, оттаивали и отбирали содержимое лунок для определения степени ингибирования инфекционной активности вируса двумя методами: 1) титрованием вируса на культуре клеток по методу Рида и Менча 
и 2) определением титра вируса в ИФА с моноклональными антителами (табл. 2).
Таблица 2. Противовирусное действие препарата МЭВ на инфекционную активность вирусов ВПГ-1, ВПГ-2 при различных концентрациях препарата и схемах внесения
    В результате исследования противовирусного действия препарата МЭВ (см. табл. 2) было установлено, что при внесении препарата одномоментно с вирусом в концентрации 0,01% раствор оказывал незначительное ингибиторное действие на репродукцию вируса в клетках на вторые сутки, но при этом также отмечался цитотоксический эффект. Инфекционный титр вирусов составил: для ВПГ-1 (штамм «L2») — 4,25 lgТЦИД50/мл, для ВПГ-2 (штамм «ВН») — 3,0 lgТЦИД50/мл. То есть снижение инфекционной активности вирусов отмечалось в среднем на 1,125 lgТЦИД50/мл по сравнению с контролем. А в концентрации 0,001% снижение инфекционности вирусов составило: ВПГ-1 («L2») титр 4,0 lgТЦИД50/мл, а для ВПГ-2 («ВН») — 2,75 lgТЦИД50/мл. Снижение инфекционной активности вирусов отмечалось в среднем на 1,375 lgТЦИД50/мл. При использовании профилактической схемы (внесение препарата в концентрации 0,001% за 1 ч до инфицирования клеток вирусом) отмечено снижение вирусной активности: ВПГ-1 («L2») титр — 3,75 lgТЦИД50/мл, ВПГ-2 («ВН») — 2,5 lgТЦИД50/мл. Вирусная активность ВПГ-1 снизилась на 1,75 lgТЦИД50/мл, ВПГ-2 — на 1,5 lgТЦИД50/мл по сравнению с контролем. При использовании концентрации 0,01% отмечалось незначительное противовирусное действие, в среднем снижение титра было на 1,5 lgТЦИД50/мл. При внесении препарата после 1 ч заражения клеток вирусом (лечебная схема использования препарата) отмечалось незначительное ингибиторное действие препарата, снижение инфекционной активности вируса в среднем отмечалось на 0,5 lgТЦИД50/мл.
    Таким образом, концентрация препарата 0,001% принимается как ТЦИД50 (ИД50) — доза, ингибирующая репродукцию вируса на 50%, дающая максимальное снижение на 2 lgТЦИД50/мл для ВПГ-1 («L2») и на 1,75 lgТЦИД50/мл 
для ВПГ-2 («ВН») инфекционной активности вируса при профилактической схеме внесения препарата (за 1 ч до воздействия вируса).
    Для оценки перспективности препарата как возможного химиотерапевтического средства в исследованиях рассчитывается химиотерапевтический индекс (ХТИ), который наиболее статистически достоверно характеризует специфическую активность препарата по формуле:

Таблица 1. Характеристика аллергенов, используемых в лабораторной диагностике [3]

    где ТЦД50 (тканевая цитотоксическая доза, вызывающая морфологические изменения ткани и снижающая жизнеспособность клеточной культуры на 50%) 
составила 0,0055, ТЦИД50 (ИД 50) (тканевая цитотоксическая доза, ингибирующая репродукцию вируса на 50%) составила 0,001.
    Если препарат имеет ХТИ<1, то это практически неактивное вещество в отношении вируса. Если ХТИ>8, то препарат обладает сильным противовирусным действием. По данным литературы, также рассматривается снижение титра вируса при действии препарата не менее чем на 1,25–2,0 lgТЦИД50/мл вирусной активности в условиях одноциклового исследования.
    По результатам проведенных исследований ХТИ для препарата МЭВ составил 5,5, что свидетельствует о противовирусной активности препарата.

   Исследование инфекционной активности ВПГ в иммуноферментном анализе

    На дальнейшем этапе определения противовирусного действия МЭВ проводили ИФА для оценки активности ВПГ в культуре клеток. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3. Инфекционная активность ВПГ при различных концентрациях препарата
    В результате исследования было выявлено, что при концентрации препарата 0,001%, внесенного за 1 ч до инфицирования вирусом (в условиях эксперимента), отмечается наиболее значительное снижение инфекционной активности вируса (титр вируса составил 1:300 по сравнению с контролем — 1:656 100).

   Заключение

    Таким образом, препарат МЭВ оказывает максимальное противовирусное действие против ВПГ в концентрации 0,001% при внесении за 1 ч до появления вируса (профилактическая схема) и менее выраженное противовирусное действие по лечебной схеме (после инфицирования вирусом). ХТИ для препарата МЭВ составил 5,5, что свидетельствует о противовирусной активности препарата. МЭВ является новым перспективным препаратом с механизмом действия, отличным от механизма известных лекарств (препараты ряда ациклогуанозина), в лечение ВПГ-инфекции.
    Данные исследования представляют собой начальную фазу наших экспериментов в этом направлении, и уже первые шаги показали перспективность МЭВ как антигерпетического препарата.


1 препарат не зарегистрирован в РФ

Литература
1. Львов Н.Д. Герпесвирусы человека — системная интегративная иммунопатология. РМЖ. 2012;22:1133–1137. [Lvov N.D. Human herpesviruses — systemic integrative immunopathology. Breast cancer 2012;22:1133 1137 (in Russ.)].
2. Ершов Ф.И., Романцов М.Г. Лекарственные средства, применяемые при вирусных заболеваниях: Руководство для врачей. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2007. [Ershov F.I., Romantsov M.G. Drugs used in viral diseases: A guide for physicians. M.: GEOTAR-Media; 2007 (in Russ.)].
3. Львов Н.Д., Панюкова Е.М., Никитина А.А. Современные методы экспресс-диагностики герпесвирусной инфекции различной локализации. Клинико-вирусологические параллели. Учеб. издание. Новые и возвращающиеся вирусные инфекции в системе биобезопасности Российской Федерации. М.; 2014. [Lvov N.D., Panyukova E.M., Nikitina A.A. Modern methods of rapid diagnosis of herpes virus infection of different localization. Clinico-virological parallels. Educational edition. New and recurring viral infections in the biosafety system of the Russian Federation. M.; 2014 (in Russ.)].
4. Львов Н.Д. Герпесвирусы — недооцененная угроза человечеству. Сб. VII науч.–практ. конференции с международным участием «Здоровье иммунной системы. Иммунотропная инфекция. Новые опухолевые маркеры». М.; 2018. [Lvov N.D. Herpes viruses — an underestimated threat to humanity. VII Scientific-practical conference with international participation “The health of the immune system. Immunotropic infection. New tumor markers”. M.; 2018 (in Russ.)].
5. Львов Д.К. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. М.: Медицинское информационное агентство; 2013. [Lvov D.K, Guide to virology. Viruses and viral infections of humans and animals. M.: Medical Information Agency; 2013 (in Russ.)].
6. Algazwi M., Smid S., Karpiniec S., Zhang W. Comparative study on neuroprotective activities of fucoidans from Fucus Vesiculosis and Undaria Pinnatifida. In. J Macromol. 2018;122:255–264.
7. Chen H.Y., Huang T.C., Lin L.C. et al. Fucoidan inhibits the proliferation of leiomyoma cells and decreases extracellular matrix-associated protein expression. Cell Physiol. Biochem. 2018;49(5):1970–1986.

Только для зарегистрированных пользователей

зарегистрироваться

Поделитесь статьей в социальных сетях

Порекомендуйте статью вашим коллегам

Предыдущая статья
Следующая статья

Авторизируйтесь или зарегистрируйтесь на сайте для того чтобы оставить комментарий.

зарегистрироваться авторизоваться
Наши партнеры
Boehringer
Jonson&Jonson
Verteks
Valeant
Teva
Takeda
Soteks
Shtada
Servier
Sanofi
Sandoz
Pharmstandart
Pfizer
 OTC Pharm
Lilly
KRKA
Ipsen
Gerofarm
Egis
Dr. Reddis
Зарегистрируйтесь сейчас и получите доступ к полезным сервисам:
  • Загрузка полнотекстовых версий журналов (PDF)
  • Актуальные новости медицины
  • Список избранных статей по Вашей специальности
  • Анонсы конференций и многое другое

С нами уже 50 000 врачей из различных областей.
Присоединяйтесь!
Если Вы врач, ответьте на вопрос:
Дисфагия это:
Нажимая зарегистрироваться я даю согласие на обработку моих персональных данных
Если Вы уже зарегистрированы на сайте, введите свои данные:
Войти
Забыли пароль?
Забыли пароль?