Разработка методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного

Введение

Ревень лекарственный (Rheum officinale B.) — лекарственное растение, широко используемое в традиционной медицине стран Европейского cоюза, Великобритании, Японии и в китайской медицине, является перспективным для применения в отечественной фармации. Ревень лекарственный (Rheum officinale B.) и ревень тангутский (Rheum palmatum L.) — близкородственные виды растений, содержащие в своем составе две доминирующие группы биологически активных веществ: антраценпроизводные и дубильные вещества [1–3]. Ревень в минимальных дозах оказывает вяжущее действие, а также уменьшает перистальтику кишечника [2]. Это объясняется действием гидролизуемых дубильных веществ (танин). Дубильные вещества оказывают выраженное вяжущее, противовоспалительное, антигеморрагическое действие, а также незначительное антимикробное, анальгезирующее и антидиарейное действие. В случае приема больших доз действуют антраценпроизводные, при этом увеличивается перистальтика и повышается тонус кишечника. Небольшие дозы ревеня стимулируют аппетит, нормализуют деятельность желудочно-кишечного тракта; средние дозировки обладают желчегонным действием; большие дозировки действуют как слабительное средство при атонии кишечника, запорах, для размягчения каловых масс при геморрое и трещинах прямой кишки. Препараты на основе корней ревеня применяются для лечения псориаза. Препараты ревеня лекарственного, обладающие слабительным эффектом, за рубежом представлены в форме таблеток, капсул и раствора для приема внутрь. Для получения оптимального фармакологического эффекта сырье ревеня сочетают с лекарственными растениями (подорожник, алоэ, сенна, фенхель), а также с курагой и черносливом. Для количественного анализа дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного была предложена методика спектрофотометрического определения в пересчете на катехин. Экспериментальным путем были подобраны оптимальные условия для экстракции дубильных веществ из сырья. Поскольку извлечение дубильных веществ проводится водой, то экстракция антраценпроизводных сводится к минимуму, поэтому данный способ извлечения в перспективе может быть использован как основа для получения лекарственных препаратов, обладающих вяжущим действием.

Таким образом, целью данного исследования является определение оптимальных условий экстракции дубильных веществ из корней ревеня лекарственного и разработка методики количественного анализа. Объектом исследования служили корни ревеня лекарственного. Электронные спектры измерялись на УФ-спектрофотометре UNICO 2800 (United Products and Instruments, США).

Собственные результаты исследования

Одной из доминирующих групп биологически активных соединений корней ревеня являются дубильные вещества, среди которых преобладают ратанин, катехин, глюкогаллин и галловая кислота [1, 3, 4]. С помощью спектрофотометра UNICO 2800 изучены электронные спектры водных извлечений из сырья. В качестве стандарта был использован катехин, дающий максимум поглощения при 282±2 нм (рис. 1), поскольку он является одним из доминирующих веществ корней ревеня лекарственного, а также достаточно распространен в других лекарственных растениях, что позволит унифицировать данную методику.

Извлечение дубильных веществ проводилось водой, поскольку дубильные вещества хорошо растворяются в воде, при этом другие фенольные соединения не будут переходить в раствор и мешать определению танинов. При разработке методики количественного анализа дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного выявлены оптимальные условия экстракции дубильных веществ: экстрагент — вода, соотношение сырья и экстрагента — 1:50, время экстракции — 15 мин на водяной бане (рис. 2).

Методика определения

Пробу корней ревеня лекарственного размалывают до частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 1 мм. 1 г размельченного сырья засыпают в колбу объемом 250 мл, добавляют 50 мл воды. Колбу закрывают, взвешивают, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане 15 мин с момента закипания экстрагента. После этого содержимое колбы охлаждают, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы водой. Полученный экстракт фильтруют (бумажный фильтр), удаляя первые 10 мл фильтрата (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу объемом 50 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Оптическую плотность определяют спектрофотометром при 282 нм. Сумму дубильных веществ (Х) рассчитывают по формуле:          

         A × 50 ×50 ×100 /

X =   E^1% ×1×a×(100 - W) 

        1 см 

где: A — оптическая плотность испытуемого где: A — оптическая плотность испытуемого раствора; E — удельный показатель поглощения стандартного образца катехина при 282 нм, равный 144; 50 — объем экстрагента, мл; 50 — объем испытуемого раствора, мл; 1 — объем аликвоты раствора А, мл; a — навеска сырья, г; W — влажность сырья, %.

Были получены следующие метрологические характеристики методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного:

число степеней свободы (f) 10;

средние выборки (X_) 25,35;

стандартное отклонение (S) 0,60731;

доверительная вероятность (P, %) 95;

критерий Стьюдента (t (P,f)) 2,23;

полуширина доверительного интервала величины (ΔX) 1,3543;

относительная ошибка среднего результата (E, %) 5,8.

Итоговые данные статистической обработки исследований указывают на то, что ошибка единичного определения суммы дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного — ±5,80%.

Выводы

Разработана методика количественного анализа дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного методом спектрофотометрии в пересчете на катехин. Содержание дубильных веществ в сырье ревеня лекарственного составляет 25,35%, что достигается подобранными оптимальными условиями экстракции дубильных веществ из корней ревеня лекарственного (экстрагент — вода, соотношение сырья и экстрагента —1:50, время экстракции — 15 мин на водяной бане). Данная методика позволяет получить высокое содержание дубильных веществ, проста и не требует использования реактивов, поэтому может быть использована для извлечения дубильных веществ из другого лекарственного растительного сырья в качестве основы для последующей разработки новых лекарственных препаратов, что призвано повысить доступность лечения для пациентов, страдающих заболеваниями пищеварительной системы.