string(5) "20265"

of the eye ball in adrenalin induced glaucoma
V.N. Alexeyev, N.J. Churilina

State Medical Academy named afterI.I. Mechnikov, St.–Petersburg

Purpose: Study of clinical and morphological changes of anterior eye segment in the initial period of adrenaline induced glaucoma (AIG).
Materials and methods: AIG formation was performed in 16 chinchilla rabbits. They were divided into 2 groups – the control group (6 rabbits) and the group with AIG (10 rabbits).
During 3 months every 2 days 0.1 ml of adrenaline solution was introduced. In every 10 days IOP by Maklakov was measured and tonography was carried out.
Results: Statistically reliable IOP increase on both eyes was observed in AIG group in the first month after beginning of adrenaline injection. By 3 month IOP level increased by 72.5% in average.
In AIG group the IOP level (P) increase registered by tonography was 32% more then in the second group. They also had detectable morphological changes near the filter zone, in iris and ciliary body. No morphological changes were found in control group.
Conclusion: Study allows finding out connections of microcircular processes and clinical symptoms of the disease. Filtration and circulation pathology seems to have vascular and fibroplastic genesis.

Первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ) относится к ряду хронически текущих полиэтиологических заболеваний, вызываемых генетической детерминацией различных наборов факторов риска (Нестеров А.П., Егоров Е.А., Батманов Ю.Е., 2000). ПОУГ формируется медленно, начинаясь с метаболических и структурных изменений различных тканей глазного яблока, которые на уровне наших современных методов клинически выявить практически невозможно. О длительности доклинического периода болезни можно только догадываться – месяцы или годы уходят на создание необходимых и обязательных условий для дальнейшего формирования глаукоматозного симптомокомплекса. Этот период может быть изучен только в эксперименте, когда мы имеем возможность определить те морфологические изменения, которые развиваются в глазу и предшествуют клиническим проявлениям глаукомы.
Общепринятой экспериментальной моделью ПОУГ в нашей стране является разработанная модель адреналин–индуцируемой глаукомы (АИГ) у кроликов по схеме Е.М. Липовецкой (1966). Эта модель является экспериментальным аналогом ПОУГ и характеризуется формированием глаукоматозного симптомокомплекса, включающего развитие трабекуло– и нейропатии в глазу (Кашин­це­ва Л.Т., Крыжановский Г.Н., Липовецкая Е.М. и др., 1995; Нестеров А.П., Егоров Е.А., Батманов Ю.Е., 2000).
Цель исследования – изучение клинико–морфо­ло­гических изменений переднего отрезка глаза в начальном периоде АИГ.
Материалы и методы исследований: моделирование АИГ проводилось на кроликах породы «Серая Шин­шил­ла», обоего пола, возраста около 2–х лет, весом 2,5–3,0 кг в количестве 16 животных.
Сформированы группы животных: группа № 1 – 6 интактных кроликов, группа № 2 – 10 кроликов с АИГ.
На протяжении 3 месяцев через день кроликам вводился раствор адреналина в количестве 0,1 мл. Через каждые 10 дней на протяжении эксперимента кроликам измеряли внутриглазное давление (ВГД) тонометром Макла­ко­ва грузом массой 7,5 г. Параллельно с контролем ВГД исследовалась гидродинамика глаз. Тоногра­фические по­казатели измерялись 1 раз в месяц тонографом ТНЦ–100 под местной анестезией 0,5% раствором дикаина грузом 5,5 г при надежной фиксации кроликов в станке. Опреде­лялись показатели истинного внутриглазного давления (Р0), коэффициента легкости оттока водянистой влаги (С), продукции камерной влаги (F), коэф­фи­циента Бек­кера (Р0/С). Показатели С, F, Р0/С рассчитывались по таблицам Фриденвальда.
После окончания клинической фазы кролики были выведены из эксперимента воздушной эмболией путем введения в ушную вену 10 мл воздуха. По истечении 15–20 минут проводилась энуклеация глаз. Глаза фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина или жидкости Буэна в течение 24–48 часов, после чего проходили стандартную методику обработки и изготовления гистологических препаратов с толщиной серийных парафиновых срезов 3–5 мкм. В ходе эксперимента в группе № 2 4 кролика погибло. Проведено исследование 24 глаз кроликов. Применялись окраски: гематоксилин и эозин, пикрофуксин по методу Ван Гизон, альциановый синий при рН=1,0; проводилась Шик–реакция, окрашивание по методу Гор­ден–Свит, Фонтан–Массон, на железо по Перлсу.
Морфологическое исследование проводилось при помощи микроскопа МИКМЕД–1, для изучения морфометрических показателей использовались окуляры и объект–микрометр «Reichert». Подсчет количества и распределения сосудов вблизи фильтрационной зоны в глазу проводился при увеличении 400 и оценивался соответственно их диаметру: артериолы – 50–100 мкм, прекапилляры – 14–16 мкм, капилляры – 3–12 мкм, венулы – 12–100 мкм [Быков В.Л., 1997]. Также оценивались степень фиброза и отложение пигмента вблизи фильтрационной зоны, в цилиарном теле, радужке.
Математическую обработку полученных клини­ко–мор­фологических данных проводили методами вариационной статистики с использованием программы «Micro­soft Excel». Определяли среднее значение (M), стандартное отклонение (?), дисперсию (?2), ошибку среднего (m), достоверность различий между группами сравнения с вычислением критерия Стьюдента (t) и уровня значимости (?), доверительный интервал (р).
Результаты клинических исследований
Нас интересовала первая стадия развития АИГ (трехмесячная индукция болезни) для изучения клинико–мор­фологических проявлений глаукоматозного процесса.
Тонометрический контроль ВГД выявил, что при введении адреналина в группе кроликов с АИГ (№ 2) уже в первый месяц эксперимента наблюдалось статистически достоверное нарастание ВГД на обоих глазах. К концу 3–месячного введения препарата его уровень увеличился в среднем на 72,5%.
Наряду с контролем ВГД в задачи исследования входило экспериментальное изучение гидродинамических (тонографических) показателей. В группе кроликов с АИГ (№ 2) тонографическое исследование выявило достоверное повышение уровня Р0 по сравнению с группой интактных кроликов (№ 1) в среднем на 32%. Наблюдалась тенденция к снижению С. Установлено увеличение F и Р0/С.
Результаты морфологического исследования
переднего отрезка глаза
Для оценки структурных изменений, влияющих на гидродинамику и отток водянистой влаги, при помощи гистологических и гистохимических методик была изучена и проведена комплексная сравнительная оценка микроциркуляторного русла (МЦР) с характеристикой сосудов вблизи фильтрационной зоны, в цилиарном теле, радужке и всех структур угла передней камеры глаза.
В группе интактных животных (№ 1) вблизи фильтрационной зоны, в радужке и цилиарном теле изменения стенок сосудов МЦР обнаружено не было: артериолы диаметром от 50 до 100 мкм состояли из трех оболочек, имевших по одному неизмененному слою клеток. Прека­пил­ля­ры диаметром 14–16 мкм стуктурно не были изменены. Капилляры диаметром 3–12 мкм представлены выстилкой эндотелия, лежащего на базальной мембране, к которой примыкали перициты. Венулы диаметром от 12 до 100 мкм: средняя оболочка хорошо развита и была представлена гладкомышечными клетками, которые, в отличие от артериальных сосудов, не имели строгой ориентации.
Соединительная ткань слабо прокрашивалась альциановым синим в бирюзовый цвет, что говорило о незначительном содержании гликозаминогликанов, при ШИК–ре­ак­ции наблюдались слабо окрашенные ШИК–по­ло­жи­тельные участки вокруг сосудов, где выяв­ля­лись гликопротеиды. Коллагеновые волокна в строме в незначительном количестве, аргирофильный каркас развит хорошо вокруг сосудов и в трабекулах. Эндотелий трабекул уплощенный, расположен соответственно по ходу щелей. Трабекулярный аппарат с четко прослеживающимся каркасом корнеоувеальной и корнеомышечной части. Фонтановы пространства как корнеоувеальной, так и корнеомышечной части округлой формы, равномерного диаметра и величины. Две части трабекулы соединялись между собой гребенчатой связкой. К трабекуле со стороны склеры примыкал венозный склеральный синус (шлеммов канал), который был образован эндотелием, а стенкой его являлся коллагеновый каркас склеры. Угол передней камеры (УПК) широкий, в его тканях отсутствовал фиброз и отложение свободного пигмента в строме.
Группа кроликов с АИГ (№ 2) имела следующие изменения: радужка и цилиарное тело были резко истончены. Стенки артериол утолщены с плазматическим пропитыванием, многие склерозированы. Имелся гиалиноз сосудов с сужением их просвета к центру, мукоидное (положительная окраска альциановым синим) и фибриноидное (положительная ШИК–реакция) набухание. Гликоз­амино­гли­ка­ны выявлялись и в трабекулярном остове. Просветы сосудов в 10% случаев были облитерированы, в остальных сужены на 60–80%. Наблюдалась редукция МЦР. Общее количество сосудов снижено за счет артериол, прекапилляров и венул. Фиброз носил распространенный выраженный характер. В зонах фиброза (апикальные концы цилиарных отростков) имелись очаги деструкции коллагена и участки с новообразованными капиллярами. В атрофированных и склерозированных трабекулах достоверное снижение их толщины по сравнению с группой интактных кроликов. Трабекулярные пространства имели щелевидный просвет, их количество снижено, эндотелий с пикнотичными ядрами. В их просветах, строме трабекул, цилиарного тела с отростками, радужке, стенках сосудов имелось выраженное отложение пигмента. Гранулы пигмента в строме вблизи фильтрационной зоны откладывались по ходу нервных окончаний, в точности визуализируя их очертания, ход и конфигурацию в виде «звездчатых, паукообразных фигур», наблюдалась своеобразная инкрустация нервных волокон. Отрицательная реакция Перлса на железо и положительные результаты импрегнации серебром в черный цвет по Фонтан–Массон свидетельствовали о меланиновой природе пигмента. Гребен­чатая связка в группе экспериментальной глаукомы (№ 2) была резко укорочена. Шлеммов канал в этой группе жи­вот­ных оставался не спавшимся и не имел отличительных морфометрических параметров по сравнению с кроликами интактной группы (№ 1), УПК глаза сужен. На­блю­да­лось снижение интенсивности импрегнации и набухание аргирофильных волокон, их отсутствие на значительном протяжении и замещение коллагеновыми волокнами.
Заключение
Проведенные клинико–морфологические исследования на модели адреналин–индуцируемой глаукомы по­зво­ляют определить взаимосвязанные процессы на уровне микроциркуляторного русла и клинической симптоматики заболевания. Патология фильтрации и циркуляции водянистой влаги в глазу имеет сосудистый и фибропластический генез. Эти данные позволят осуществить патогенетический подход к терапии глаукомы.

Статья принята в печать 21 декабря 2006 г.

Литература
1. Нестеров А.П., Егоров Е.А., Батманов Ю.Е. Глаукома: патогенез, принципы лечения. // VII Съезд офтальмологов России: Тезисы докладов. – Москва, 2000. С. 87–91.
2. Липовецкая Е.М. Развитие экспериментальной глаукомы при длительном введении адреналина. // Офт. журнал. – 1966, № 3. – С. 221–223.
3. Быков В.Л. Частная гистология человека. – СПб: Сотис, 1997. – 300 с.